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ELISA试剂盒 > > 美国药典培养基
猪神经内分泌分泌蛋白55(GNAS)ELISA
猪神经内分泌分泌蛋白55(GNAS)ELISA
品名:
猪神经内分泌分泌蛋白55(GNAS)ELISA
货号:
F49352-A
产品品牌:
科兴,TSZ
价格:
   电话:15902171569
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猪GNAS酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:                                                            96T
18pg/ml-700pg/ml

使用目的:
本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中 GNAS含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪 GNAS 水平。用纯化的猪GNAS 抗体包被微
孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入GNAS,再与 HRP标记的 GNAS抗体
结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP
酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 GNAS
呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值), 通过标准曲线计算样品中猪GNAS
浓度。
试剂盒组成
1  30倍浓缩洗涤液  20ml×1 瓶  7  终止液  6ml×1瓶
2  酶标试剂  6ml×1瓶  8  标准品(1200pg/ml)  0.5ml×1 瓶
3  酶标包被板  12 孔×8 条  9  标准品稀释液  1.5ml×1 瓶
4  样品稀释液  6ml×1瓶  10  说明书  1 份
5  显色剂 A液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 张
6  显色剂 B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含 NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.  标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
600pg/ml  5号标准品  150μl的原倍标准品加入 150μl标准品稀释液
300pg/ml  4号标准品  150μl的5号标准品加入 150μl标准品稀释液
150pg/ml  3号标准品  150μl的4号标准品加入 150μl标准品稀释液
75pg/ml  2号标准品  150μl的3号标准品加入 150μl标准品稀释液
37.5pg/ml  1号标准品  150μl的2号标准品加入 150μl标准品稀释液


2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl, 待测样品孔中先加样品稀释液40μl,
然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.  温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30分钟。
4.  配液:将 30倍(48T的 20倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍(48T的20 倍)稀释后备用
5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复5 次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7.  温育:操作同 3。
8.  洗涤:操作同 5。
9.  显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.
10.  终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11.  测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
操作程序总结:


计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值
大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计
算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存: ;2-8℃。
2.有效期:6 个月

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