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ELISA试剂盒 > > 美国药典培养基
人谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)ELISA试剂盒
人谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)ELISA试剂盒
品名:
人谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)ELISA试剂盒
货号:
F46237-A
产品品牌:
科兴,TSZ
价格:
   电话:15902171569
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人谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
0.6 pmol/ml -22 pmol/ml
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)水平。 用纯化的
人谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次
加入谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4),再与 HRP 标记的谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)抗体结
合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶
的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽
过氧化物酶 4(GPX4)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值) ,通过标准
曲线计算样品中人谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)浓度。
试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(40pmol/ml) 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂 A 液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含 NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
20 pmol/ml 5号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
10 pmol/ml 4号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
5 pmol/ml 3号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2.5 pmol/ml 2号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
1.25 pmol/ml 1号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50μl, 待测样品孔中先加样品稀释液40μl,
然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍) 。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30分钟。
4. 配液:将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。

操作程序总结:

计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式, 将样品的 OD 值代入方程式, 计算出样品浓度, 再乘以稀释倍数,
即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值
大于标准品孔第一孔的 OD 值) ,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计
算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5) 。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存: ;2-8℃。
2.有效期:6 个月

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