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ELISA试剂盒 > > 美国药典培养基
西马特罗ELISA试剂盒
西马特罗ELISA试剂盒
品名:
西马特罗ELISA试剂盒
货号:
F26211-A
产品品牌:
科兴,TSZ
价格:
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西马特罗Cimaterol酶联免疫分析(ELISA

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

1 使用目的:

本试剂盒用于组织,肌肉,饲料和尿样中西马特罗Cimaterol 残留的定量检测。

2 实验原理

本试剂盒采用竞争ELISA 方法,在微孔板包被有西马特罗Cimaterol 偶联抗原,加入西

马特罗Cimaterol 标准品或样品,游离西马特罗Cimaterol 与微孔条上预包被的西马特罗

Cimaterol 偶联抗原互相竞争抗西马特罗Cimaterol 抗体酶标记物,用TMB 底物显色,加入

终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在450nm 波长下进行检测,吸光值与样品中西马

特罗Cimaterol 含量成反比,通过标准曲线计算样品中西马特罗Cimaterol 的含量。

3 试剂盒组成

3.1 预包被的西马特罗Cimaterol 偶联抗原的可拆酶标板:1 块(12 孔×8 条)。

3.2 西马特罗Cimaterol 标准品:6 瓶(1ml/瓶),含量分别是: 0 ppb0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7

ppb,8.1 ppb

3.3 抗西马特罗Cimaterol 抗体酶结合物:1 瓶(6ml)。

3.4 显色液A1 瓶(6ml)。

3.5 显色液B1 瓶(6ml)。

3.6 终止液:1 瓶(6ml),2M 硫酸。

3.7 样本稀释液:1 瓶(10×, 6ml),用于样品稀释用。

3.8 浓缩洗涤液:1 瓶(20×,20ml),用于洗板。

3.9 说明书一份。

4 需要而未提供的材料

4.1 设备

4.1.1波长450nm酶标仪。

4.1.2粉碎机。

4.1.3量筒。

4.1.4振荡器。

4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。

4.1.7微量移液器。

4.2 试剂

4.2.1去离子水或蒸馏水。

4.2.2 甲醇。

5 贮存

5.1 试剂盒贮存于2~8℃,切勿冷冻

5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存

6 注意事项

6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。

6.2 不要使用过期试剂盒。

2

6.3 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2℃),建议至少回温2小时。

6.4 标准品中含有西马特罗Cimaterol,使用时应特别注意,操作时应带手套。

6.5 终止液中含有硫酸,使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。

6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用,否则会影响试验结果。

6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响

实验结果。

6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液,否则会影响实验结果

6.9 混合试剂时应避免起泡。

7 工作液准备

7.1 西马特罗Cimaterol标准品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb

7.2 浓缩洗涤液:用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用

7.3 样本稀释液:用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用

7.3 显色剂:已备用,避免光线直照

7.4 反应终止液:已备用

8 样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则

会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)

8.110g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液

8.2强力振荡3分钟

8.3Whatman No 1滤纸过滤

8.425μl处理后的样品,加入25μl样本稀释液于反应孔中(样本稀释倍数为2

9 酶免分析步骤

9.1 实验须知

9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2℃),时间约2小时。回温至室

温(25±2℃)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存

注:一定保证回温充分,否则影响检测的精确度和准确度。

9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存

9.1.3 请不要改变分析程序

9.1.4 请使用精确的微量移液器

9.1.5 操作一旦开始,请不要中断任何程序

9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作

9.1.7 为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样

9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面

9.2 分析步骤

9.2.1 预先进行编号,标记B0、标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测

9.2.2 取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存

9.2.3 样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(20×)稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)

9.2.4 B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml标准品溶液

9.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液

9.2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液

9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗西马特罗Cimaterol抗体酶结合物

9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。

9.3 37℃温浴30min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)

9.3.1 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液

体。

3

9.4 反应

9.4.1 洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A,再加 50μl

色液B;轻微晃动反应板使之彻底混匀

9.4.2 37℃温浴10min

9.4.3 每孔中加入50μl终止液,混匀

9.4.4 450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。

10 结果计算

10.1定量分析

10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以第一个标准(0标准)

的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B00μg/L标准溶液的平均吸光度值

10.1.2以西马特罗Cimaterol浓度的对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。根

据样品百分吸光度值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为西马特罗Cimaterol浓度的对数

值,求得反对数即为测定液中西马特罗Cimaterol浓度Cppb

10.1.3由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释

倍数。

10.2 半定量测定

10.1.1目测半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品吸光

度值的高低比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

10.1.2仪器半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品颜色

深浅比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

11 特异性

物质 交叉反应

西马特罗Cimaterol 100%

12 试剂盒参数

本试剂盒检测下限为0.05ppb

B0吸光度最佳值应大于1.0

试剂盒吸光度板内误差小于8%,板间误差小于15%。

用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80%。

13

试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ppb~8.1ppb

14 分析限制

本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLCGC/MS加以确证。

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